产品货号:
MT2703
中文名称:
耐热LAMP扩增试剂盒(SYBR荧光染料法)
英文名称:
Hot SYBR LAMP Kit
产品规格:
100T
发货周期:
1~3天
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本试剂盒基于耐热的Bst7.0 DNA聚合酶,用于DNA模板的LAMP高效扩增反应,含SYBR Green染料可进行实时荧光检测。
Bst 7.0 DNA聚合酶为经重构架设计保留了Bst DNA聚合酶的链置换活性,并提高了其温度耐受性,该酶可以耐受85℃加热。这种短暂的高温耐热性能,具有以下几个优点。
- 在高温85℃加热2min后,可以将双链DNA进行变性,提高了引物的结合能力,从而提高LAMP检测的灵敏度。
- 在未经处理的检测样本中,可实现扩增反应同时裂解样本(从组织中释放DNA),从而实现核酸免提取的LAMP扩增。
- 在高温条件下打开引物的非特异性结构,明显降低LAMP反应的非特异性扩增。
- 短暂的高温可瞬时灭活病毒,降低检测样品的生物安全性。除此外,Bst7.0 DNA聚合酶中不含有甘油成分,因此可用于建立LAMP引物mix与酶制品的冻干品,以提高LAMP检测制品的稳定性和易用性。除此外,该制品还可以用于其它恒温扩增实验,包括CPA、SMAP等。
组分 | 规格 |
Bst7.0 DNA聚合酶(3.2U/μL) | 250μL |
2×SYBR Hot IsoAmp Buffer | 1mL |
保存:-20℃,有效期2年。短期保存置于4℃,可保存3个月,避免反复冻融。
- Bst7.0 DNA聚合酶中含22%海藻糖,不含甘油,可用于冻干。
- 关于矿物油的使用,在配制完LAMP反应体系后,可加入一滴矿物油覆盖于反应液上部,以减少气溶胶的污染。
- 在用于其它恒温扩增反应时(如CPA、SMAP等),可参考如下策略进行使用,反应时间可能会需要调整。
- 在0.2mL EP反应管中加入下述试剂配制LAMP反应体系
成分 用量 2×SYBR Hot IsoAmp Buffer 10μL Bst7.0 DNA Polymerase 2.5μL 10×LAMP Primer Mix 2μL 模板DNA(或粗样本) X μL ddH2O 至20μL - 10×LAMP Primer Mix浓度:FIP/BIP分别为16μM、LoopF/B分别为4μM、F3/B3分别为2μM。
- 荧光定量PCR仪的设置:可以使用标准定量PCR仪,也可使用恒温荧光设备。
步骤1:60℃ 10s
步骤2:60℃ 50s收集信号,循环25次
总反应时间为25min。
关于制品冻干:
- 引物及酶制品的冻干(可参考)
将该制品进行冻干处理,获得冻干品。成分 用量 Bst7.0 DNA聚合酶 2.5μL 10×LAMP Primer Mix 2μL 45%海藻糖 0.5μL 总体积 5μL - 冻干制品的LAMP扩增
向一份冻干品中加入10μL的2×SYBR Hot IsoAmp Buffer溶解冻干制品,并加入最多10μL的检测DNA模板,总体积为20μL。进行LAMP扩增。
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